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定氮儀測定樣品中蛋白質的過程詳解

來源: http://www.radiant-cloud.com  類別:實用技術  更新時間:2015-10-09  閱讀

      定氮儀是測定樣品中蛋白質含量的重要儀器,其測定過程主要包括樣品消化、定氮儀的準備、樣品測定、儀器的清洗和結果計算這幾部,為了詳細了解定氮儀測定樣品中蛋白質的過程,下面我們就來一一進行說明:

      1、樣品消化:

      100ml消化瓶中+樣品(固體0.2~2.0g,液體10~20ml)+催化劑(硫酸鉀6g、硫酸銅0.2g)+濃H2SO420ml,混合加熱至澄清透明的藍綠色溶液,即消化液。將消化液冷卻 ,移入100ml容量瓶定容備用。

      2、定氮儀的準備 

      (1)觀察蒸發爐內水位,不能超過不銹鋼電極。(如果超過,請先把水排完)

      (2)關掉排水閥,打開主電源,打開冷卻水,打開綠色蒸汽開關,然后觀察電流表。燈電流表指針升到4A(安培)左右,關掉蒸汽開關。待其回到0A(安培)后再打開蒸汽開關。電流升到4A(安培)后再關掉,這樣反復開關(0-20)左右直到蒸氣從塑料管內噴出,讓其噴半分鐘左右,關掉蒸氣開關,儀器進入正常的待機狀態。

      3、樣品測定 

      (1)取錐形瓶+2%硼酸10ml+混合指示劑1-2滴放在定氮儀的托架上,在消化管中加入10ml的樣品消化液放到蒸餾器上,按國標加入NaOH和H2O,設定好蒸餾時間6分鐘,打開蒸汽開關進行蒸餾。 

      (2)蒸餾結束后,先取下硼酸接受瓶,再關掉蒸氣開關,然后戴上手套迅速拿下消化管。 

      (3)接受瓶中的吸收液用0.05mol/LHCl標準溶液滴定至終點。(平行操作兩次) 

      4、儀器的清洗: 

樣品測定結束后,用水清洗堿泵多次后關閉冷卻水;打開蒸氣開關,打開排水閥取下消化管,使蒸發爐內水全部排完。

      5、結果計算:  

                                   C(V樣—V空)HCl ×0.014 × F      
      蛋白質含量(%)=—————————————————— × 100                                  

                                            m樣×(V檢/V總)


      式中:C------鹽酸標準溶液的物質量的濃度(mol/L);            
               V樣-----樣品消耗鹽酸標準溶液的體積(mL);
               V空-----試劑空白消耗鹽酸標準溶液的體積(mL);
               0.014-----氮的毫摩爾質量(g/mmol); 
               m樣------試樣質量,g;              
               F------氮換算為粗蛋白質的系數。

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